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透明带结构与受精结局的关系分析

透明带结构与受精结局的关系分析

国玉蕊1,黄国宁孙,王亚平1,刘红2,韩伟2,蒲艳2,刘军霞2

(1.重庆医科大学基础医学院,重庆400016}2.重庆市妇产科医院生殖与遗传研究所,重庆400013)

【关键词】受精卵;透明带;异常受精;偏振光显微镜

DOI:10.3969/j.issn.1004—3845.2010.02.018

透明带(ZP)是自初级卵泡早期阶段,由卵子和颗粒细胞共同分泌形成,由4种糖蛋白(ZP,、ZP:、ZP。、ZP。)交联形成的具有双折射性的三维网状结构。ZP糖蛋白在与精子识别及结合过程中起着重要的作用[1],精子进入质膜后激活卵,触发皮质颗粒释放,改变ZP结构,引起ZP反应从而阻滞多精子进入,保证单精子受精。以往对ZP的研究多采用荧光标记或染色等外侵性手段,不能应用于人类辅助生殖技术(ART)。Bertrand等瞳1报道,透明带厚度(ZPT)与受精结局有相关性,ZPT>22弘m时应采用卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)以避免受精失败。传统ZP全层厚度测定不能完全反映ZP,偏振光显微镜(polscope)能改变通过晶体或类晶体的偏振光振动方向,显示出具有明暗差的图像,以此对该类物质定性、定量分析,无创性检测人类ZP结构。本观察即采用偏振光显微镜分析受精前后及不同受精结局中ZP的差别,旨在探索ZP与受精结局的关系。

一、资料与方法

1.对象及分组:选择2007年1月至2009年4月在重庆妇产科医院生殖与遗传研究所助孕的符合以下条件的患者。女方<35岁,单纯输卵管病因,超排卵反应正常,获卵数>4枚,男方精子密度和活力正常的体外受精(IVF)助孕周期。受精18~

22

h原核(PN)评估后,拍摄见3个PN的受精卵,

纳入3PN受精卵组;未见PN的成熟卵,纳入0PN受精卵组;11个IVF周期,受精18~22

PN评估

后,随机拍摄半数2PN受精卵纳入2PN受精卵组。女方同IVF的纳入标准,男方存在不育的病理因素,预行ICSI的36个助孕周期的卵母细胞在取出

2~4h后拆除颗粒细胞并摄像,追踪MII卵受精后

的胚胎质量,发育为可用胚胎的卵纳入MII卵组。

2.方法:促排卵方案按本所常规长方案[3]进行。将卵母细胞或受精卵转入5肛lG-MOPSTM微滴(试剂均为VitrolifeG5系列,瑞典)的玻璃培养皿

(WillCoWells

BV

dish,荷兰)中,在Polscope-

2000H倒置显微镜(Nikon,日本)组装OosightlM系统和软件(CRIInc,美国)下观察,并在最清晰的赤道平面摄像。常规IVF卵母细胞经孵育3h后,将经密度梯度离心法处理后的精子加入体积约为50弘l的IVF微滴,密度控制在约1万条/卵,每滴加入一枚卵母细胞,加精子6h后将卵移出精液滴,部分拆除颗粒细胞。Polseope摄像后转入编号的G1TM微滴中,受精评估后置于37"C、6%CO。、5%0:和89%N。三气培养箱中培养。ZP图像的测量按本所常规方法[4](图1)。对照受精前后及不同受精结局的受精卵ZP差别。

几:内层,ZP厚度密度最大的一层,ML:中间层,OL:外层

图1Polscope拍摄图像的测量

3.统计学方法:采用SPSSl7.0软件进行统计分析。患者年龄、ZPT、ZP密度(ZPD)以zd=5表示,采用独立样本t检验、单因素方差分析分析数据,检验标准取a=0.05。

【收稿日期】2009—12—04;

【修回日期】2010—01—12

【作者简介】国玉蕊(1982~),女,河北人,硕士生,解剖与组织

透明带结构与受精结局的关系分析

胚胎学专业.(’通讯作者)E-mail:gnhuan9217@sina.COl

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