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一株拮抗辣椒疫霉的假单胞菌的分离与鉴定

46卷 4期

2006年8月4日

微生物学报ActaMicrobiologicaSinica46(4):516~5214August2006

一株拮抗辣椒疫霉的假单胞菌的分离与鉴定

何延静,刘海明,胡洪波,许煜泉,张雪洪

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(上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢教育部重点实验室 上海 200240)

摘 要:从甜椒根际土壤中分离到一株对辣椒疫霉(Phytophthoracapsici)具有强拮抗作用的假单胞属(Pseudomonasspp.)菌株GP72,研究其拮抗性表明,对多种植物病原真菌均有很强的抑制作用。对该菌株进行形态特征、生理生化、BiologGN、(G+C)mol%含量测定及16SrDNA序列分析,鉴定为绿针假单胞菌(Pseudomonaschlororaphis)。特征为单细胞,极生单个鞭毛,不能利用聚B-羟基丁酸盐,能够较强地利用Biolog系统95种碳源中的45种作为底物生长,较弱利用其中的6种底物,与绿针假单胞菌(Pseudomonaschlororaphis)的相似性达到98%,相似指数为0172。用热解链方法测得基因组DNA的(G+C)mol%含量为6511mol%。以16SrDNA序列为基础构建了包括13株邻近种属细菌在内的系统发育树,其中与模式致金色假单胞菌的同源性最近。关键词:绿针假单胞菌;GP72;鉴定;BiologGN;16SrDNA

中图分类号:Q939 文献标识码:A 文章编号:0001-6209(2006)04-0516-06

伴随着现代农业的飞速发展,大面积作物病虫害的防治越来越依赖于化学杀虫剂的应用,但随之而来的环境污染和病虫害抗药性的产生使得人们对现代农业的可持续性发展提出了新的要求。近年来生物防治的观点得到了世界各国的广泛关注,寻找有效的生防菌以及研究它们相关的防治机制也就成为了当今人们关注的热点。

假单胞菌(Pseudomonasspp.)是活跃在植物根际的一类微生物。许多菌株有抑制植物病害、促进植株生长的作用,属植物促生菌(PlantGrowth_PromotingRhizobacteria,PGPR)类。大量研究

[1~5]

真菌如辣椒疫霉、终极腐霉、瓜果腐霉等的,因而从甜椒的根际土壤中筛选新的具有潜在生防效果的生防细菌具有非常重要的意义。本文报道从甜椒根际

土中分离筛选到一株对植物病原菌有拮抗作用的假单胞菌属菌株GP72,并对其进行了形态特征、生理生化鉴定、BiologGN、(G+C)mol%含量测定和16SrDNA序列分析,鉴定为绿针假单胞菌(Pseudomonaschlororaphis)。

1 材料和方法

111 材料

11111 菌种来源:假单胞属菌株(Pseudomonasspp.)GP72系土壤中分离得到。假单胞菌(Pseudomonasspp.)M18及供试植物病原菌株系本实验室所保存菌株。甜椒疫霉(Phytophthoracapsici)由上海交通大学农学院提供。致金色假单胞菌(P.aureofaciens)30_84,荧光假单胞菌(P.fluorescens)Q2_87,铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)PAO1由美国农业部LindaSThomashow教授赠送。

11112 培养基:King.sB培养基(KMB):蛋白胨20g,甘油15g,K2PO401392g,无水MgSO401732g;琼脂16g,pH715,定容至1L。1P3KMB:配方与KMB相同,但最后定容至3L(无琼脂)。马铃薯葡萄糖培养基(PDA):马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,定容至

明,这些具有生防作用的菌株尤以荧光性假单胞菌(FluorescentPseudomonadsspp.)为主,包括铜绿假单胞菌菌

[8,9]

[6,7]

(Pseudomonasaeruginosa)、致金色假单胞

[10,11][12,13]

(Pseudomonasaureofaciens)、绿针假单胞菌

(Pseudomonaschlororaphis)、荧光假单胞菌

(Pseudomonasfluorescens)等。有的已成为商业用生防产品,如瑞士BioAgriAB公司研制的基于绿针假单胞菌的生防药剂Cedomon,用于大麦和燕麦种期

[4]

处理可防治苗期病害。其它绿针假单胞菌如SPR044

[10]

,MA342

[11]

,SPB1217

[14]

都经初步试验证

明可作为有效的生防菌株。

我国华东地区经济作物甜椒的种植比较广泛,并且较易受到一些植物病原菌的侵害,特别是一些

基金项目:上海市科技兴农重点攻关项目(3_3_1)

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通讯作者。Tel:86_21_34204854;Fax:86_21_34204051;E_mail:xuehzhang@http://www.wendangxiazai.com

作者简介:何延静(1982-),女,河南南阳人,硕士研究生,主要从事微生物系统分类学研究。E_mail:yanjinghe106@http://www.wendangxiazai.com其他作者:蒋海霞

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