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小鼠免疫器官摘取及淋巴细胞分离

“小鼠免疫器官摘取及淋巴细胞分离”实验过程

1. 培养皿加入纱布,在纱布上滴2ml淋巴细胞分离液。

2. 脱颈处死小鼠,在75%酒精中浸泡30s(示意消毒小鼠)。

3. 无菌条件下将腹部剪开,脱皮。(2min)

4. 选取小鼠腹部左侧,剪开腹膜,深红色细长组织即脾脏(淋巴细胞组织)

5. 用镊子从下方夹取脾脏,,剔除结缔组织和脂肪后,将组织置于滴有小鼠淋巴细胞分离液的纱布上。

6. 脾脏用弯头镊子在纱布上研磨至无血色组织后,纱布上加入1ml淋巴细胞分离液,再用移液器吸取研磨的液体,移至1.5ml离心管内。(3min)

7. 离心(1500rpm,3min)留上清,移入新的15ml 离心管中,去除红细胞,此时可以取胸腺。(可以做到这里停止,示意淋巴细胞和免疫器官胸腺)

8. 在装有上清的离心管中加入3ml 1640培养基,离心1500rpm,3min,取沉淀,弃上清,重复清洗2次。(6min)

9. 在显微镜下将细胞浓度调为5×106个/ml备用。

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