当前位置:文档下载 > 所有分类 > 医药卫生 > 细胞转染技术简介
侵权投诉

细胞转染技术简介

细胞转染技术简介

转染,是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。

理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术,是目前转染效率最高的方法,同时具有细胞毒性很低的优势。但是,病毒转染方法的准备程序复杂,常常对细胞类型有很强的选择性,在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法,则各有其特点。

本公司生产的高效转染试剂VigoFect,是一种以阳离子非脂性物质为主的配方组分,该类物质介导的细胞转染,是目前非病毒转染方法中转染效率最高的方法。VigoFect使用方便,转染效率高,对细胞毒性小,并有广谱的转染特性。在许多实验室长期使用,获得了优异的效果。一些实验室用VigoFect进行SiRNA的转染,也获得满意的结果。

需要指出的一点,无论采用哪种转染技术,要获得最优的转染结果,可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多,从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态,到转染方法的操作细节,都需要考虑。

细胞传代

(1) 试验准备:200ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌),酒精棉球,废液缸,试管架,微量移液器,记号笔,培养皿,离心管。

(2) 弃掉培养皿中的培养基,用1ml的PBS溶液洗涤两次。

(3) 用Tip头加入1ml Trypsin液,消化1分钟(37。C,5%CO2 )。用手轻拍培养瓶壁,观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。

(4) 加入1ml的含血清培养基终止反应。

(5) 用Tip头多次吹吸,使细胞完全分散开。

(6) 将培养液装入离心管中,1000rpm离心5min。

(7) 用培养液重悬细胞,细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。

(8) 将合适体积完全培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。

(9) 将培养皿转入CO2培养箱中培养,第二天转染。

细胞转染

1)转染试剂的准备

A. 将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。

B.震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡,。

2) 选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后在加入合

第1页

猜你喜欢

返回顶部